以2019-nCoV新型冠狀病毒的高度特異性序列為靶區(qū)域，設(shè)計特異性引物和熒光探針，通過多重?zé)晒釶CR擴增，實現(xiàn)對2019-nCoV新型冠狀病毒RNA的檢測。這種方法也是目前新冠病毒檢測試劑盒中最常用的檢測方法。靈敏度及特異性都很高，檢測時間在2h左右。同時，這種方法對樣本采集以及檢測實驗室規(guī)范要求很高。若樣本采集不到位，標(biāo)本所帶病毒量較少；實驗操作失誤，造成病毒RNA降解，易造成檢測出現(xiàn)“假陰性”。為解決此問題，可在試劑盒中加入內(nèi)源性內(nèi)參的引物探針，用內(nèi)源性內(nèi)參的結(jié)果來質(zhì)控標(biāo)本采集提取及實驗操作流程是否無誤。

以2019-nCoV新型冠狀病毒的高度特異性序列為靶區(qū)域，設(shè)計特異性逆轉(zhuǎn)錄引物及擴增引物，進行普通PCR擴增，PCR產(chǎn)物采用Sanger測序儀的片段分析功能進行檢測，根據(jù)在目標(biāo)片段長度位置是否出現(xiàn)檢測峰為依據(jù)進行結(jié)果判斷。此方法可根據(jù)不同待檢病毒靶標(biāo)設(shè)計不同目標(biāo)長度的產(chǎn)物，進行多靶標(biāo)檢測，進而區(qū)分患者感染的是哪種冠狀病毒，做到冠狀病毒的分型檢測。

高通量測序技術(shù)通過對待測目標(biāo)的文庫構(gòu)建，測序，序列拼接比對獲得待測目標(biāo)基因組序列的全貌。對在此次武漢疫情爆發(fā)初期，通過構(gòu)建宏基因組文庫進行NGS測序鑒定出新型冠狀病毒，并成功繪制出其全基因組序列信息。迅速判斷出此次爆發(fā)的冠狀病毒為一種新的冠狀病毒，與SARS病毒序列高度相似。正是有了新冠病毒全基因組信息，才能使國內(nèi)科學(xué)家及診斷企業(yè)研發(fā)熒光定量試劑盒用于新冠病毒的檢測。目前，到了疫情攻堅戰(zhàn)的此刻，新冠病毒溯源、流行、變異規(guī)律、變異監(jiān)測、分子流行病學(xué)、人類感染的發(fā)病機理等尚待進一步明確。

這時，NGS技術(shù)在解析病毒變異情況和追蹤病毒起源及演化方面，扮演著不可替代的核心作用。

此次2019-nCoV病毒為RNA病毒，在傳播過程存在發(fā)生變異的可能性，并在一定程度上將影響RT-PCR的敏感性，采用高通量測序方法則可解決這一問題，并監(jiān)測到可能的病毒變異。部分病毒含量較低的樣本，在低于RT-PCR最低檢出限時，采用高通量測序方法則可以提高陽性檢出率，避免漏檢和錯檢；對于疑似感染、多重感染或繼發(fā)感染病原，采用高通量測序方法則可進行并發(fā)檢測，提供更多可能感染的病原信息。

總之，從測定未知病原，到鑒定已知序列，再到陽性樣本的結(jié)果確認(rèn)以及可能存在的序列變異動態(tài)監(jiān)控，都可以采用NGS方法有效應(yīng)對。但NGS方法對實驗室及實驗人員操作要求是這幾個檢測方法中最高的。

抗體是機體感染病毒后，體液免疫應(yīng)答的產(chǎn)物。通常，免疫球蛋白M(IgM)抗體在感染早期出現(xiàn),免疫球蛋白G(IgG)抗體在感染中晚期出現(xiàn)。通過血清學(xué)檢測，利用抗原抗體的特異性結(jié)合原理，配合標(biāo)記物顯色篩查，實現(xiàn)對人體血清、血漿或全血中新型冠狀病毒IgM/IgG抗體的體外定性檢測。

簡言之，檢測特異抗體也可以明確患者是否“近期或既往感染過新型冠狀病毒”，有助于核酸檢測陰性但臨床上疑似患者的確診。其主要優(yōu)點在于現(xiàn)場即時診斷，不要任何檢測設(shè)備，具備快速、便捷、高效檢測的特點，可用于社區(qū)基層醫(yī)院甚至家庭的早期初步篩查。

另一方面，核酸檢測多采用上呼吸道樣本（咽拭子為主），采集過程對于醫(yī)護人員暴露風(fēng)險極大，而抗體檢測是通過血液樣本檢測，感染風(fēng)險降低。但抗體檢測容易受到血液標(biāo)本中的一些干擾物質(zhì)（如非特異IgM、類風(fēng)濕因子、溶血所致的高濃度度血紅蛋白等）的存在而出現(xiàn)“假陽性”結(jié)果，所以抗體檢測必須采用IgM 和IgG同時檢測且通常需多次動態(tài)檢測來確認(rèn)。

因此，特異抗體檢測陽性不能像病毒核酸檢測陽性一樣作為病毒感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”。